RNA基因修饰技术应用于负电荷纳米超声对比剂携载与递送siRNA的专家共识

中国中西医结合影像学杂志2023年3月第21卷第2期·103专家共识RNA基因修饰技术应用于负电荷纳米超声对比剂携载与递送siRNA的专家共识山东省医学会超声医学分会[摘要]纳米超声对比剂具有独特的液气相变，声孔效应等特征，是实现sRNA递送的重要潜在载体。目前，sRNA的携载多是通过正负电荷吸引方式，需构建表面正电荷对比剂或引人聚乙烯亚胺等中间介质，存在阳离子毒性问题。负电荷纳米超声对比剂无阳离子毒性，具有更高的生物安全性，但无法直接吸附讯NA。如何实现负电荷纳米超声对比剂携载RNA,亟待进一步研究和规范。为此，制定本共识，以噬菌体pi29马达包装RNA(3 WJ-pRNA)基因修饰技术，制备基因颗粒/超声对比剂.纳米复合体，验证其具有较好的稳定性、生物安全性、对比超声成像能力及较强的sRNA递送能力，为规范负电荷纳米超声对比剂的RNA携载与递送奠定基础。[关键词]纳米超声对比剂：基因修饰技术：纳米复合体：sRNA递送：超声检查基于sRNA的基因治疗具有设计简单、可针对3 WJpRNA可根据碱基配对原则自身折叠形成各种致病靶点等优势，有望成为包括恶性肿瘤在内3个角度的空间结构，优势是3条侧链顶端可分别进的难治性疾病的有效治疗策略)。但sRNA进人细行修饰，实现不同的功能，其核心结构由核酸序列组胞发挥作用面临两大挑战：一是暴露血液会有稳定成，易于修饰合成，且无毒性，是siRNA携载、RNAW性问题并造成免疫原性：另一个是负电荷的siRNADNA适体修饰的合适载体区O。亲脂性胆固醇修饰无法自己跨膜进入胞内。因此，sRNA的递送需借的3W叮pRNA基因颗粒可锚定结合到脂质体或外泌助各类纳米载体。常用的载体主要包括病毒载体和体等具有壳核结构的纳米载体6,1)，为纳米超声对脂质体载体，尽管这些载体广泛用于基础研究，却不比剂的3 WJ-pRNA修饰、进而携载siRNA提供了一适合直接用于临床。递送载体应用有着安全性和有种新思路。效性的双重标准，病毒载体会带来安全性上的不确定1.13 WJpRNA基因纳米颗粒制备性，脂质体载体则面临效率上的挑战。纳米超声对比3 WJ-pRNA具有固定的核心序列（表1）。根据剂是一种新型的纳米载体，粒径通常在200~500nm,核心序列分别设计合成4条RNA单链（表2），分别不仅具有超声成像能力，而且还是一种有潜力的药为Chol修饰的aW]侧链(aWJ-Chol,Strand1,锚定模物或基因递送载体B4。由于sRNA带负电荷，因此块)、A10-3.2修饰的bW侧链(bWJA10-3.2,Strand2,目前包括超声对比剂在内的大部分纳米载体携载靶向模块)，siCAT.1修饰的cW耵侧链(cWJ-siCAT.1,RNA多是通过正负电荷吸引，这种方式需构建表Strand3,治疗模块)、治疗模块的反义链(siCAT.1面为正电荷的纳米载体，或需引入正电荷聚乙烯亚胺antisense,Strand4),设计修饰策略见图1。将4条等中间介质，缺点是存在阳离子毒性问题。相反，RNA单链分别溶解于焦碳酸二乙酯中，得到浓度为表面为负电荷的纳米超声对比剂不存在阳离子毒性50~100μmol母液。将等摩尔比例的4条RNA单问题，其有更高的生物安全性和临床应用价值。因链DEP℃水溶液混合于退火缓冲液中，混匀后进行程此，如何实现siRNA负载至负电荷纳米超声对比剂，序性降温[]，即可得到基因纳米颗粒。亟待进一步研究和规范。为此，制定本共识，以规范表13WJ-pRNA核心序列负电荷纳米超声对比剂携载与递送sRNA等问题。侧链碱基序列aWJ5'-uuGccAuGuGuAuGuGGG-3'1基于噬菌体phi29马达包装RNA(three-waybWJ5'-cccAcAu AcuuuGuuGAucc-3'junction of bacteriophage phi29 motor packagingcWJ5'.GGAucAAucAuGGcAA-3'RNA,3WJ-pRNA)修饰的基因纳米颗粒制备与鉴定注：3 WJ-pRNA为噬菌体phi29马达包装RNA。1.23 WJpRNA基因纳米颗粒的鉴定基因纳米颗粒的鉴定主要包括合成效率、分子D0L:10.3969.issn.1672-0512.2023.02.001量及形貌。其中，SYBR Green I可与核酸双链结合[通信作者]李杰，Email:jielic@emil.sdu.edu.cno发出绿色荧光，荧光强度与双链核酸数量相关，因此